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ELISA試劑盒從免疫原性及不亂性等方面臨5種抗原進(jìn)行比照,*選擇活化酯法組成的BSA-SM/b作為免疫抗原,通過(guò)雜交瘤技術(shù)獲得1株能不亂分泌抗鏈霉素特異性單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株5C10。通過(guò)試驗(yàn)比照了5種樣品處理方法,ELISA試劑盒選擇用Careez法處理并4倍稀釋后用于測(cè)定。為探究一種能夠敏捷有用的查看牛奶中鏈霉素殘留的方法,本研討選用單克隆抗體技術(shù)等技術(shù),合工抗原,制備出抗鏈霉素單克隆抗體,建立了查看牛奶中SM殘留的ELISA測(cè)定法,組建成鏈霉素敏捷查看ELISA試劑盒并進(jìn)行了優(yōu)化和實(shí)踐使用。
ELISA試劑盒作為一種活絡(luò)、敏捷、特異性強(qiáng)的方法,酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法正逐漸使用于藥物的殘留查看,海內(nèi)外現(xiàn)已建立了多種查看牛奶中鏈霉素留的理化查看方法,當(dāng)然有些方法比照活絡(luò)、,但由于方法凌亂、耗時(shí)長(zhǎng)、花費(fèi)大、技術(shù)懇求原因而不適合大批量樣品的選擇。制備的腹水效價(jià)為1∶1280000,蛋白濃度為26.2mg/ml,與其他抗菌藥物的交叉反應(yīng)率均低于0.1%。規(guī)范曲線的批內(nèi)變異系數(shù)為11.87%,均勻批間變異系數(shù)為8.017%。建立ELISA試劑盒規(guī)范曲線的線性方程為y=1.8061-0.4932x(線性規(guī)模25~2500ng/ml),其LOD為8.11ng/ml,低于劃定的牛奶中鏈霉素zui低殘留定量200ng/ml??墒遣灰?guī)范用藥會(huì)引起畜禽產(chǎn)品尤其是泌乳動(dòng)物乳汁中的藥物殘留,對(duì)人類的健康構(gòu)成匿伏危害。