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    人(human)骨堿性磷酸酶(BAP)

    發(fā)布時(shí)間: 2012-03-15  點(diǎn)擊次數(shù): 1338次

     人(human)骨堿性磷酸酶(BAP)
    本試劑盒僅供研究使用 標(biāo)本:血清或者血漿

    一、 試 劑 組 成
    精密度微孔板96孔 (Microtitration Strips) 1塊 2~8℃干燥保存
    酶標(biāo)偶合液 (Conjugate ) 1瓶 12.0毫升 2~8℃冷藏保存
    標(biāo)準(zhǔn)品 (Standard) 5瓶 各1.0毫升 2~8℃冷藏保存
    呈色劑A (Substrate A) 1瓶 6.0毫升 2~8℃避光冷藏保存
    呈色劑B (Substrate B) 1瓶 6.0毫升 2~8℃避光冷藏保存
    終止液 (Stopping Solution) 1瓶 6.0毫升 室溫保存
    20倍濃縮洗滌液 (Rinsing Buffer x 20) 1瓶 60.0毫升 2~8℃冷藏保存
    5倍濃縮樣品稀釋液 (Diluent x 5) 1瓶 15.0ml 2~8人(human)骨堿性磷酸酶(BAP) ℃冷藏保存
    英文說(shuō)明書,中文說(shuō)明書 各一份 室溫保存

    二、注意事項(xiàng)
    1. 此試劑為體外檢測(cè)試劑,效期內(nèi)使用,試劑應(yīng)視為傳染物,不同總批號(hào)的試劑不能混用。
    2. 使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出。室溫放置至少30分鐘,
    3. 濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶后,請(qǐng)于37℃孵育15分鐘。
    4. 濃縮樣品稀釋液出現(xiàn)結(jié)晶后,請(qǐng)于37℃孵育15分鐘
    5. 若24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),標(biāo)本可存放于2~8℃。不需及時(shí)實(shí)驗(yàn),標(biāo)本-20℃保存,避免反復(fù)凍融。
    6. 在反復(fù)清洗微孔板,并扣干微孔中的殘余液體,否則將降低度,造成吸光度偏離的假像。
    7. 加樣完畢后,應(yīng)注意輕微搖動(dòng)微孔人(human)骨堿性磷酸酶(BAP) 反應(yīng)條,以便使孔中的液體充分混勻。
    8. 試劑盒保存于2~8℃,請(qǐng)勿冷凍,有效期請(qǐng)見盒內(nèi)標(biāo)示。

    三、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
    1.使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出,室溫放置至少30分鐘。
    2.準(zhǔn)備各種實(shí)驗(yàn)儀器及材料,如微量移液器,吸頭,醫(yī)用蒸餾水等
    3.濃縮洗液與醫(yī)用蒸餾水1︰19倍稀釋后成為應(yīng)用洗滌液
    4.濃縮樣品稀釋液與醫(yī)用蒸餾水1︰4倍稀釋成應(yīng)用樣品稀釋液
    5.用應(yīng)用樣品稀釋液來(lái)稀釋樣品,按照1:100的體積比來(lái)稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應(yīng)用樣品稀釋液中,充分混勻待用。)

    四、操 作 步 驟
    1.取出酶標(biāo)板,設(shè)空白孔,依照次序?qū)?yīng)分別加入100μl的標(biāo)準(zhǔn)品于空白微孔中(空白孔視為0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品,用醫(yī)用蒸餾水替代)
    2、分別標(biāo)記樣品編號(hào),加入100μl的稀釋樣品于空白微孔中(不同的樣本采用不同的吸頭)。
    3、將酶標(biāo)板置于37℃溫育30分鐘;
    4、將酶標(biāo)板板取出,將其中的液體甩去,每個(gè)孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后,立即甩去液體;
    5、每個(gè)孔中加滿應(yīng)用洗滌液后,輕微振搖酶標(biāo)板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去,在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。
    6、重復(fù)第5個(gè)步驟5次,在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。
    7、在標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔中加入100μl的酶標(biāo)偶合溶液。
    8、將96孔板置于37℃溫育30分鐘。
    9、將酶標(biāo)板取出,將其中的液體甩去,每個(gè)孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后,立即甩去液體。
    10、每個(gè)孔中再次加滿洗滌應(yīng)用液后,室溫輕微振搖酶標(biāo)板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去,在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。
    11、重復(fù)第5個(gè)步驟5次,在吸水紙上將酶標(biāo)板拍干。
    12、在每個(gè)孔中加入底物A 50μl后立即加入底物B 50μl。輕輕振蕩混勻。(A液、B液采用不同的吸頭加樣)
    13、將酶標(biāo)板置于37℃避光溫育反應(yīng)15分鐘。
    14、每個(gè)微孔中加入50μl的終止液,輕輕振蕩混勻。
    15、在酶標(biāo)儀上,450nm處測(cè)定OD; 顯色后,15分鐘內(nèi)進(jìn)行測(cè)定。
    16、根據(jù)制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算樣本含量

    五、結(jié) 果 判 斷
    1. 儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值;
    2、檢測(cè)值范圍:0 – 1200U/L
    3、敏感度:1.0 U/L

     

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