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    豬圓環(huán)病毒抗體Elisa定性試劑盒說明書

    發(fā)布時(shí)間: 2016/2/1  點(diǎn)擊次數(shù): 605次
    提 供 商: 研域(上海)化學(xué)試劑有限公司 資料大?。?/td>
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    實(shí)驗(yàn)原理
    本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中豬圓環(huán)病毒抗體(PCV Ab)表達(dá)。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中圓環(huán)病毒抗體(PCV Ab)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP 標(biāo)記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),與CUTOFF 值相比較,從而判定標(biāo)本中豬圓環(huán)病毒抗體(PCV Ab)的存在與否。
    試劑盒組成
    1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
    2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 陽性對(duì)照 0.5ml×1 瓶
    3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 陰性對(duì)照 0.5ml×1 瓶
    4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
    5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
    6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個(gè)
    標(biāo)本要求
    1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
    2.不能檢測(cè)含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    操作步驟
    1. 編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2 孔、陽性對(duì)照2 孔、空白對(duì)照1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
    2. 加樣:分別在陰、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,
    3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
    4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
    5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此重復(fù)5 次,拍干。
    6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
    7. 溫育:操作同3。
    8. 洗滌:操作同5。
    9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.
    10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
    11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
    計(jì)算和結(jié)果判定:
    試驗(yàn)有效性:陽性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15陰性判定:樣品OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為豬圓環(huán)病毒抗體(PCV Ab)陰性陽性判定:樣品OD 值≥ 臨界值(CUT OFF)者為豬圓環(huán)病毒抗體(PCV Ab)陽性。
    注意事項(xiàng)
    1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
    2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
    3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
    4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    5.底物請(qǐng)避光保存。
    6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),參考波長(zhǎng)為630nm
    7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M 的硫酸,使用時(shí)必須注意安全。
    保存條件及有效期
    1.試劑盒保存:;2-8℃。
    2.有效期:6 個(gè)月

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