小鼠卵巢癌標志物CA125酶聯(lián)免疫分析
發(fā)布時間: 2016/5/3 點擊次數(shù): 610次
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研域(上海)化學試劑有限公司 |
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小鼠卵巢癌標志物CA125酶聯(lián)免疫分析 本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中卵巢癌標志物 CA125含量。 實驗原理 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠卵巢癌標志物 CA125 水平。用純化的小鼠 卵巢癌標志物 CA125 抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入卵巢 癌標志物 CA125,再與 HRP標記的卵巢癌標志物 CA125抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗 體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在 HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在 酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的卵巢癌標志物 CA125 呈正相關。用 酶標儀在 450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠卵巢癌標志物 標本要求 1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融 2.不能檢測含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 小鼠卵巢癌標志物CA125酶聯(lián)免疫分析操作步驟 1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色 15分鐘. 10.終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn))。 11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止 液后 15分鐘以內(nèi)進行。 操作程序總結(jié): 計算 以標準物的濃度為橫坐標, OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的 OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。 小鼠卵巢癌標志物CA125酶聯(lián)免疫分析注意事項 1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未 用完,板條應裝入密封袋中保存。 2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。 3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。 4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本 OD值 大于標準品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計 算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。 5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 6.底物請避光保存。 7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準. 8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。 9.本試劑不同批號組分不得混用。 10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。 保存條件及有效期 1.試劑盒保存:;2-8℃。 2.有效期:6個月 |
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